يادرو كىسلاتاسىنى بىرىكتۈرۈشنىڭ پرىنسىپلىرى

يادرو كىسلاتاسىنىڭ بىرىكىشى قاتتىق فازىلىق سىئاللىق ئامىد ترىگلىتسېرىد ئۇسۇلى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىدۇ ، بۇنىڭ بىلەن DNA نىڭ 3 ′ ئۇچى قاتتىق فازا ئاستى قىسمىدا ھەرىكەتلىنىدۇ ۋە لازىملىق DNA پارچىلىرى بىرىكتۈرۈلگۈچە 3 ′ 5 ′ يۆنىلىشتە يادروغا قوشۇلىدۇ. .بۇ DNA پولىمېراسىنىڭ قوللىنىلىشى بىلەن DNA بىرىكتۈرۈشكە ئوخشىمايدۇ.

بىرىكتۈرۈش جەريانىدا بىرىنچى بازىنىڭ 3 ′ ئاخىرى CPG دا ھەرىكەتلەنمەيدۇ ، كېيىنكى بازىنىڭ 5′-OH di-p-tolyl trityl DMT بىلەن قوغدىلىدۇ ، بازىدىكى ئامىنو گۇرۇپپىسى بېنزوئىك كىسلاتا بىلەن قوغدىلىدۇ. -OH ئاندىن ئامىنو فوسفات بىرىكمىسى بىلەن قوزغىتىلىدۇ.1 ئاساسى 5 5′-OH نىڭ 1 ئاساسى ۋە كېيىنكى بازىنىڭ 3′-OH فوسفات ترىگلىتسېرىدنى ھاسىل قىلىدۇ ، ئاندىن يود بىلەن فوسفات ترىگلىتسېرىدقا ئوكسىدلىنىدۇ ، ئىككىنچى بازىدىكى قوغدىغۇچى 5′-OH تەرىپىدىن ئېلىۋېتىلىدۇ. كېيىنكى بازىنى قوشۇش ئارقىلىق ئىككى خىل كىسلاتالىق DM دەۋرىيلىكى قوشۇلىدۇ ، بىرىكتۈرۈلگەندىن كېيىن 5′-OH دىكى قوغدىغۇچى ئاجىز كىسلاتا بىلەن ئېلىۋېتىلىدۇ. ئىسسىقلىق بىلەن قويۇقلاندۇرۇلغان ئاممونىي ھىدروكسىد بىلەن ئاممونىي ھىدروكسىد چىقىرىۋېتىلىدۇ ، بۆلەك ۋاكۇئۇم قۇرۇتىلىدۇ ، يادرو كىسلاتاسى سۇيۇق خروموگرافىيە ياكى PAGE ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇلىدۇ.

ئولىگو بىرىكمىسىنىڭ قەدەم باسقۇچلىرى

قەرز قايتۇرۇش

The5 ئاخىرقى DMT قوغداش گۇرۇپپىسى TCA ھەل قىلىش چارىسى قوشۇش ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلىدۇ.

ئاكتىپلاش

ئاكتىپلاشتۇرغۇچىنى oligonucleotide مونومېر بىلەن ئارىلاشتۇرۇپ ، ئاكتىپ oligonucleotide مونومېر ئارىلىقىنى ھاسىل قىلىدۇ.

Coupling

5 تېرمىناللىق گىدروكسىل گۇرۇپپىسى ئاكتىپ ئولىگونۇكلېئوتىد ئارىلىقىدا پەيدا بولۇپ ، گېنغا قارشى قويۇقلىشىش رېئاكسىيەسىدە تۇراقسىز فوسفات ترىگلىتسېرىد رىشتىسى ھاسىل قىلىدۇ.

Capping 

قاپلاش ۋاكالەتچىسىنىڭ قوشۇلۇشى قويۇقلىشىش رېئاكسىيەسىگە قاتناشمىغان ئارتۇقچە گىدروكسىل گۇرۇپپىسى بىلەن ئاتسېتىلسىيە قاپلاش رېئاكسىيەسىنى قىلىدۇ.

ئوكسىدلىنىش 

تەركىبىدە يود ئېرىتمىسىنىڭ قوشۇلۇشى ئوكسىدلىنىش ئارقىلىق تۇراقسىز فوسفات رىشتىسى بىلەن رېئاكسىيە قىلىپ ، مۇقىم فوسفورلۇق كىسلاتا ترىگلىتسېرىد رىشتىسى ھاسىل قىلىدۇ.

Cyanoethyl Cleavage

بىرىكتۈرۈلگەندىن كېيىن يادرو كىسلاتاسى مەھسۇلاتى ، DEA ئېرىتمىسى قوشۇلۇپ ، فوسفات ترىگلىتسېرىد رىشتىسىدىن سىئونوئېتىل گۇرۇپپىسىنى چىقىرىۋېتىدۇ.

Cleaved & Deprotection

يادرو كىسلاتاسى پارچىلىرى قويۇق باسقۇچلۇق توشۇغۇچىدىن قويۇق ھالەتتىكى ئاممونىي ھىدروكسىد ئېرىتمىسى قوشۇلۇپ ، ئاندىن قىزىتىلىپ ، قوغداش گۇرۇپپىسىنى بازىنىڭ ھىدروگېن رىشتىسىدىن چىقىرىۋېتىدۇ.